Определение группы крови (ABO) и резус-фактора (Rh)

Антигены системы группы крови Rh закодированы двумя генами: RHD и RHCE. RHD кодифицирует антиген D, в то время как RHCE кодифицирует антигены Cc и Еэ. Антиген d используется для отметки отсутствия антигена D. RHD и RHCE кодируют схожие полипептиды, которые на мембране эритроцитов формируют комплекс с гликопротеином, связывающим Rh. Функция антигенов Rh до конца неизвестна, хотя, учитывая фенотип клеток Rh 0 , предполагается, что антигены Rh могут играть структурную роль в мембране эритроцитов.

Структура антигенов Rh предполагает наличие транспортных белков, а гликопротеин, связанный с Rh, может играть определенную роль в транспорте аммиака. Существуют 45 антигенов, которые были отнесены к системе групп крови Rh, среди которых наиболее распространены и важны D, C, с, E и е, но возможно стать аллоиммунными на антигены C, с, E и е при переливании крови и беременности, но они гораздо меньше иммуногенов, чем D. Менее 3% от общего населения, подверженного действию антигенов C, с, E, е становятся алоиммунными, поэтому предтрансфузионное тестирование обычно не проводится на эти антигены. После антигенов, А и антиген D свидетельствует о высокой иммуногенности антигена (в 20 раз выше, чем у большинства других Rh-антигенов). При проведении гемотрансфузии D-положительных эритроцитов почти 80% от D-отрицательных реципиентов вызывают образование анти-D-антител. К тому же, анти-D иммунизация способствует дальнейшему синтезу антител по сравнению с другими антигенами в рамках группы крови или за пределами системы Rh. Также антиген D вовлечен в 95% случаев гемолитической болезни новорожденных. Человек считается "резус положительным", если его эритроциты выражены антигеном D, а термин "резус отрицательный" относится к случаю, когда антиген D отсутствует. Отсутствие антигена встречается у 15-17% людей белой расы и реже – у других групп населения. У «белых людей» отсутствие антигена D связано с делецией гена RhD, тогда как у азиатов и афроамериканцев связано с инактивацией генов, а не их делецией. Некоторые эритроциты, несущие D-антиген, требуют длительной инкубации с анти-D реагентом для появления реакции агглютинации. Эти эритроциты считаются положительным антигеном D, и описаны как рецессивный D, ранее известный как Du (менее чем в 1% случаев). Считается, что фенотип рецессивного гена D появляется в ходе одного из трех механизмов:

1) Наследственная передача RHD гена, кодирующего белок D с ослабленной антигенной экспрессией. Наиболее распространена среди чернокожего населения и связана с гаплотипом DCE, а среди белого населения связана с гаплотипами DCе или DcE.

2) Взаимодействие гена D с другими генами. Люди с геном D в транспозиции по отношению к гену С (например, DсE/Се) представляют ослабленную экспрессию гена D.

3) Наследственная передача гена, кодирующего антигенный комплекс D, в котором отсутствуют определенные эпитопы, называется и неполным D. Данные лица могут производить анти-D в случае их трансфузии с D-положительными эритроцитами. Среди них DVI представляет по меньшей мере эпитопы и данные лица представляют наивысший риск при иммунизации, но менее значим, чем D-отрицательные лица. Доноры D-рецессивного гена должны считаться Rh(D)-положительными и важно, что они не должны быть определены ошибочно как «Rh отрицательные», потому что D-слабый антиген может вызвать иммунный ответ, если перелить через кровь Rh-отрицательным лицам. Лица с D-слабым могут быть перелиты с Rh-положительной кровью (исключение – DVI), а беременные не нуждаются в профилактике с анти-D иммуноглобулином. При использовании соответствующего моноклонального анти-D реактива большинство антигенных детерминантов, включенных прежде чем Du, не должны отличаться от D-гена в обычных условиях. Фенотип Rh0 появляется, когда эритроциты не проявляют свойств Rh-антигена по меньшей мере двумя возможными механизмами: наследственная передача гена, кодирующего гликопротеин, связывающий анормальный Rh, с нормальными генами RHD и RHCE (или наследственность) определенной мутации гена связана с. Фенотип Rh0 связан структурными аномалиями эритроцитов и гемолизом. Эти лица производят алоантитела, взаимодействующие всеми эритроцитами, кроме Rh0. Анти Rh0 антитела возникают при алоиммунизации вследствие несовместимых трансфузий Rh-системы или беременности. Очень редко могут производиться естественные антитела в системе Rh без известных антигенных стимуляторов (анти-Е, анти-С№), которые в большинстве случаев не соответствуют с точки зрения клиники. Также при иммунных гемолитических анемиях аутоантитела часто обладают антиактивностью. Большинство анти-I-антител являются IgG, особенно IgG1 и IgG3 (неполные агглютинины), хотя некоторые могут быть IgM и обычно не активируют комплемент. Аглютинующие антитела типа IgM являются транзиторными и появляются в начале иммунизации. Наиболее распространены анти-антитела, которые могут провоцировать гемолитическую болезнь новорожденных и тяжелые гемолитические трансфузионные реакции. Их частота значительно снизилась одновременно с анти-D профилактикой у Rh-отрицательных беременных с резус-положительным плодом. Анти-C-, C-, E-антитела связаны с гемолитической болезнью новорожденных и легкими гемолитическими трансфузионными реакциями. Типирование резус-фактора эритроцит

Подготовка пациента: Сдача крови натощак.

Материал: Венозная кровь.

Интерферирующие факторы:

Ложноположительные реакции:

1. Эритроциты в виде столбика монет;
2. Полиагглютинация;
3. Гемолитические анемии с тепловыми аутоантителами (наличие антител IgG на поверхности эритроцитов) — повторное определение группы с реагентом, из которого удален альбумин, содержащий анти-D агглютинирующие антитела, способные агглютинировать с эритроцитами в солевой суспензии (анти-D).

Ложноотрицательные реакции:

1. Гемолитическая анемия новорожденных (блокирование D-антигенных ситусов материнскими антителами);
2. У лиц с рецессивным Rh D геном возможна слабая и поздняя агглютинация.

Стабильность пробы: образец сохраняется 48 часов при температуре 2–8 °C.

Метод: Определение группы крови системы АВ0 моноклональными антителами, определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер), (реакция прямой гемагглютинации).

Тест-системы: набор ЭРИТРОТЕСТ-ЦОЛИКЛОНЫ Анти-А, Анти-В и Анти-АВ, анти-D Супер)

Основные показания к назначению анализа:

1. Перед гемотрансфузией;
2. Перед некоторыми инвазивными или хирургическими процедурами с возможными геморрагическими осложнениями, требующими переливания крови;
3. Дородовой и послеродовой иммуногематологический мониторинг матери и ребенка;
4. Доноры крови.

Интерпретация результатов: полное определение фенотипа Rh назначается донорам крови, его следует учитывать при переливании крови у девочек и женщин в период менопаузы, у больных, постоянно подвергающихся трансфузиям и у реципиентов неподходящих антиэритроцитарных антител.

• Rh(D)-положительные, если полученные результаты, ясно положительные с обеими анти-D тест-сыворотками, а аутоконтроль - отрицательный;
• Rh(D)-отрицательные, если получены явно отрицательные результаты с обеими анти-D тест-сыворотками, независимо от результатов аутоконтроля.

Дополнительное тестирование обязательно, если получены слабо положительные результаты или противоречивые результаты с тест-сыворотками, а самоконтроль – отрицательный, а также если получены положительные результаты с обеими тест-сыворотками, а аутоконтроль – положительный.

У доноров, если первичный тест Rh D отрицательный, необходимо проводить второе тестирование для выявления рецессивного D-фактора (это не является обязательной процедурой для реципиентов крови, которым нужно провести переливание крови с резус-отрицательным фактором). К тому же, определение наличия рецессивного D-фактора у беременных женщин исключает ненужное лечение анти-D иммуноглобулином. Прежде чем определить пациента как D-рецессивного, необходимо установить факт, что больному не проводилось в последнее время переливание крови с Rh+ эритроцитами.